全ぜん反射はんしゃ照明しょうめい蛍光けいこう顕微鏡けんびきょう

落射型がた全ぜん反射はんしゃ蛍光けいこう顕微鏡けんびきょうの構造こうぞう

試料しりょう
エバネッセント光こう
カバーガラス
オイル
対物たいぶつレンズ
蛍光けいこう（検出けんしゅつする信号しんごう）
励起れいき光こう

全ぜん反射はんしゃ照明しょうめい蛍光けいこう顕微鏡けんびきょう（ぜんはんしゃしょうめいけいこうけんびきょう、Total internal reflection fluorescence microscope）、TIRF（Total Internal Reflection Fluorescence）顕微鏡けんびきょう、エバネッセント場じょう顕微鏡けんびきょうとは、カバーガラスなどの全ぜん反射はんしゃ面めんの裏側うらがわにトンネル効果こうかによりしみだすエバネッセント光こうを励起れいき光源こうげんとした顕微鏡けんびきょうである。

拡散かくさんしない光源こうげんが必要ひつようなため、通常つうじょうレーザー光源こうげんが用もちいられる（オリンパス社しゃには楔くさび形がたプリズムを使用しようした、アーク光源こうげんのシステムも存在そんざいする）。

原理げんり

油あぶら浸ひた対物たいぶつレンズによる落射照明しょうめいで対物たいぶつレンズ顕微鏡けんびきょう側がわの中心ちゅうしんから外はずれた場所ばしょに励起れいき光こうを入射にゅうしゃさせて、油あぶら浸ひたオイルとカバーガラスの境界きょうかい面めんで全ぜん反射はんしゃを発生はっせいさせるか、もしくは特殊とくしゅなコンデンサを油あぶら浸ひたとし、スライドガラスと試料しりょうの境界きょうかい面めんで全ぜん反射はんしゃを起おこす角度かくどで励起れいき光こうを入射にゅうしゃさせる。

すると、この境界きょうかい面めんにエバネッセント場じょうが形成けいせいされ、試料しりょう側がわの厚あつさ数すう百ひゃくナノメートルが照明しょうめいされる。従したがって、この厚あつみの範囲はんいでのみ励起れいき光こうが当あたった試料しりょうからの蛍光けいこうが発生はっせいする。

このため、背景はいけいに光ひかりノイズの少すくない非常ひじょうに暗くらい状態じょうたいで、カバーガラス近傍きんぼうの物質ぶっしつを励起れいきすることができる。この特徴とくちょうから、光学こうがく顕微鏡けんびきょうの解像度かいぞうどをはるかに超こえた、たとえば蛍光けいこう分子ぶんし一いち個この挙動きょどうを観察かんさつすることも可能かのうである。

この顕微鏡けんびきょうにより情報じょうほう通信つうしん研究けんきゅう機構きこうの研究けんきゅうグループが、ATP合成ごうせい酵素こうそが分子ぶんしモーターとして回まわっている様子ようすの可視かし化かに成功せいこうしている^[1]など、in vivo（実際じっさいの生体せいたい内ない）における分子ぶんしの挙動きょどうなどの研究けんきゅうについて活用かつようされている。