Milieu chromogène
Les milieux chromogènes sont très utilisés en microbiologie pour la mise en évidence d'activités enzymatiques par l'apparition d'une coloration spécifique. Leur introduction au laboratoire doit beaucoup à Alain Rambach.
La coupure par l'enzyme d'un substrat dit chromogène produit une molécule colorée, le chromophore. Pour les milieux chromogènes, le chromophore précipite au niveau de la colonie. Cette technique est différente de la mise en évidence d'activités par l'action des produits de la rédaction sur un indicateur de pH, rarement un indicateur rédox, du milieu.
Exemples
modifierLe premier chromogène rencontré est l'ONPG (orthonitrophénylgalactoside) dont l'hydrolyse, par la
La diffusion de l'utilisation de chromogènes est devenue très importante par leur incorporation dans les milieux de culture : les colonies sont ainsi colorées par le ou les chromophore(s). Des colonies sont naturellement colorées ; la lecture est alors complexe car les couleurs peuvent s'additionner.
L'association de plusieurs chromogènes est souvent réalisée, par exemple la recherche de la
Milieu URImodifierDeux types de colonies sur URI. Les colonies rouges sont |
Milieu CPSEmodifierMilieu adapté au diagnostic des infections urinaires, par la mise en évidence d'une activité |
Milieu Chromagar pour les levuresmodifierAutre exemple avec le milieu Chromagar pour les levures. |
Milieu SALMmodifierMilieu sélectif des bactéries à Gram négatif qui permet la mise en évidence de Salmonella dans les selles grâce à la révélation d'une activité estérase que spécifique des salmonelles. |
CAN2modifierMilieu sélectif des levures qui permet la mise en évidence de Candida albicans par la mise en évidence de l'activité hexosaminidase. |
Milieux existants
modifierDe nombreux milieux chromogènes existent. Malheureusement, les fabricants ne donnent pas toujours le nom des activités enzymatiques recherchées mais seulement les couleurs obtenues. Les tableaux ci-dessous (en préparation) tente une approche exhaustive qui devra être complétée.
Enzymes recherchées | Taxons correspondants |
---|---|
Staphylococcus aureus | |
Listeria monocytogenes, Enterococcus-Klebsiella-Enterobacter, Serratia, Hafnia (KESH), Bacillus cereus, | |
E. coli O157 | |
Coliformes (1) | |
E. coli | |
Candida albicans | |
Estérase | Salmonella |
Phosphatidyl-myoinositol-1-phosphate phospholipase C | Probablement Listeria monocytogenes |
Probablement Pseudomonas aeruginosa | |
Phosphatase |
Les milieux chromogéniques sont composés pour assurer la culture et une sélection, aussi importante que possible, des microorganismes cibles.
Nom du milieu | Enzymes recherchées | Utilisation |
---|---|---|
Uriselect Biorad | Analyse des urines en biologie médicale | |
CPSE Biomérieux | Analyse des urines en biologie médicale | |
UTI | Analyse des urines en biologie médicale | |
Chrom Id VRE | Recherche des Enterococcus résistants aux glycopeptides | |
HiChrom rapid Enterococci Agar | Recherche d'Enterococcus | |
Chrom Id VRE E. coli O157 | Recherche d'E. coli O157 | |
ALOA (Listeria monocytogenes) | Dénombrement des Listeria monocytogenes | |
Nombreux milieux | Dénombrement d'E. coli (microbiologie alimentaire) | |
Candiselect Biorad | Recherche de Candida albicans | |
CAN2 Biomérieux ou ChromId Candida | Recherche de Candida albicans | |
HiChrom OGYE | ||
Bacillus cereus HiCrome Agar | Dénombrement de Bacillus cereus | |
SAIDE Biomérieux | Staphylococcus aureus | |
MRSA [Bio-Rad Laboratories (MRSASelect), Becton Dickinson (CHROMagar MRSA) bioMérieux (chromID MRSA)] | Recherche des SARM | |
ESBL Biomérieux
[BBL CHROMagar ESBL] |
Probablement |
Recherche des entérobactéries productrices de BLSE |
STRB Biomérieux
[chromID Strepto B…] |
Recherche des streptocoques du groupe B |
Nature des chromophores
modifierLes chromogènes et les chromophores ne doivent pas être toxiques pour les bactéries recherchées, à la concentration utilisée.
Un exemple de chromophore pour la
Mais d'autres substrats sont possibles pour cette enzyme probablement en raison des droits de brevets.
Formule à déterminer, probablement protégée par le secret industriel, ex. : aldol- |
Formule à déterminer
Cyclohexènoesculetine- |
Bibliographie
modifier- Catherine de Beaumont, Intérêt des milieux chromogènes en microbiologie, 2006.
- Jean-Noël Joffin et Guy Leyral, Dictionnaire des techniques, Microbiologie technique, CRDP d'Aquitaine (voir www.reseau-canope.fr/).
- Alain Rambach, Opéron no 102, article de l'initiateur des milieux chromogènes.