o-Nitrophenyl-βべーた-D-galactopyranosid

o-Nitrophenyl-βべーた-D-galactopyranosid (ONPG) ist ein artifizielles Glycosid und chromogenes Substrat für βべーた-Galactosidasen, z. B. das vom lacZ Gen von Escherichia coli codierte Enzym.

Strukturformel
Allgemeines
Name	o-Nitrophenyl-βべーた-D-galactopyranosid
Andere Namen	2-Nitrophenyl-βべーた-D-galactopyranosid ONPG Niphegal
Summenformel	C12H15NO8
Kurzbeschreibung	weißer geruchloser Feststoff
Externe Identifikatoren/Datenbanken
CAS-Nummer 369-07-3 EG-Nummer 206-716-1 ECHA-InfoCard 100.006.106 PubChem 96647 ChemSpider 87255 DrugBank DB01920 Wikidata Q287775
Eigenschaften
Molare Masse	301,25 g·mol−1
Aggregatzustand	fest
Schmelzpunkt	192 °C
Löslichkeit	löslich in Wasser
Sicherheitshinweise
GHS-Gefahrstoffkennzeichnung keine GHS-Piktogramme H- und P-Sätze H: keine H-Sätze P: keine P-Sätze
Soweit möglich und gebräuchlich, werden SI-Einheiten verwendet. Wenn nicht anders vermerkt, gelten die angegebenen Daten bei Standardbedingungen (0 °C, 1000 hPa).

Eigenschaften

Bestimmte βべーた-Galactosidasen hydrolysieren ONPG zu Galactose und dem gelben Farbstoff o-Nitrophenol.

Verwendung

In der Biochemie und mikrobiologischen Diagnostik wird ONPG zur qualitativen und quantitativen Bestimmung der Aktivität von βべーた-Galactosidasen verwendet, siehe ONPG-Test.

Ein ausgezeichnetes Substrat der βべーた-Galactosidase ist das Disaccharid Lactose. Ähnlich wie X-Gal, das für die qualitative βべーた-Galactosidasebestimmung verwendet wird, ist ONPG ein Lactoseanalog, das für die βべーた-Galactosidase ein chromogenes Substrat darstellt.

In einem Reaktionsansatz entstehen durch die hydrolytischen Spaltung des farblosen ONPG Galactose und das gelbgefärbte o-Nitrophenol. Um eine Reaktion pseudoerster Ordnung zu erhalten, muss ONPG im Überschuss im Ansatz vorhanden sein. Die Intensität der Gelbfärbung ist dann nur abhängig von der Konzentration der βべーた-Galactosidase und der Reaktionsdauer. Durch Zugabe von Natriumcarbonat (Verschiebung des pH-Werts in den basischen Bereich (pH 11)) wird die Reaktion abgestoppt, da βべーた-Galactosidasen, wie die meisten Enzyme, bei hohen pH-Werten inaktiv sind.

Die Menge des entstandenen o-Nitrophenols wird durch Absorption in einem Photometer bei 420 nm bestimmt. Aus der Reaktionsdauer, dem Absorptionswert und einem Wert für die eingesetzte Biomasse (Proteinkonzentration, Trübung der Bakterienkultur etc.) kann eine spezifische Aktivität der βべーた-Galactosidase berechnet werden.

Siehe auch

• ONPG-Test
• X-Gal

Literatur

• J. H. Miller Assay of βべーた-Galactosidase, In: J.H. Miller Experiments in Molecular Genetics, S. 352–355, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, 1972, ISBN 0-87969-106-9.