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Taq聚合酶

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Taq聚合酶,外切がいせつ
结合ざいDNAはち聚体じょうてきDNA聚合酶
鑑定かんてい
しるべTaq-exonuc
PfamPF09281旧版きゅうばん
InterProえいInterProIPR015361
SCOPえいStructural Classification of Proteins1qtm / SUPFAM
Taq外切がいせつ
DNA聚合酶
鑑定かんてい
しるべTaq-exonuc
PfamPF09281旧版きゅうばん
InterProえいInterProIPR015361
SCOPえいStructural Classification of Proteins1qtm / SUPFAM

Taq聚合酶ゆかりせんよしみいん于1976ねん嗜热细菌水生すいせい棲熱きん中分なかぶん离出てきDNA聚合酶[1]。Taq聚合酶的常用じょうよう简称ゆうTaq PolあるTaq酶)。Taq酶常用じょうよう于放だいたんDNAかただんてき聚合酶链しきはんなかPCR)。

水生すいせい棲熱きん生活せいかつざい温泉おんせんあずか深海ふかうみ热泉なか,从其中分なかぶん离的Taq酶可うけたまわPCRちゅうしょ需要じゅようてき高温こうおん[1][2]よし此Taq酶取だいりょうげんさきようPCRなかてきだい肠杆きんDNA聚合酶[3]。Taq酶的さい适活せい温度おんど为75–80°C,ざい92.5°C时半おとろえだか于2しょう时,95°C时为40ふん钟,97.5°C时为9ふん钟;Taq酶可ざい72°C时于10びょうない复制いち含有がんゆう1000个碱基对てきDNA[4]

Taq酶的缺点けってんいち缺乏けつぼう3'はしいた5'はしてき外切がいせつ校正こうせい活性かっせい[4],从而导致Taqざい复制时保しんこうはらさき测得てき错误りつ为每9000个核苷酸中出なかいで现1错误[5]

ためりょうくだてい錯的りつ科學かがく陸陸ろくろく續續ぞくぞく發現はつげんりょう其他以取だいTaq聚合酶的聚合酶。舉例らいせつ,Pfu具有ぐゆう3'いたり5'はし外切がいせつ酵素こうそ特性とくせいてき聚合酶,錯機りつやくため1/2.6x1000000。ただしあい較於Taq聚合酶,Pfu合成ごうせいDNAてき速度そくど較慢,いん此也ゆう混合こんごう使用しようてきはいかた製作せいさく出來できこんてき電腦でんのう模擬もぎ技術ぎじゅつ以及新興しんこう生物せいぶつ技術ぎじゅつ,也能透過とうか人工じんこうおさむあらためTaq酶的結構けっこうらい增強ぞうきょう性能せいのう購買こうばい這些商業しょうぎょうてき酶可以降いこうてい實驗じっけんてき錯誤さくごりつ

Taq聚合酶有一個特性除了合成速度快、錯率だか以外いがいかえかい使合成ごうせいてき產物さんぶつ末端まったんたいゆういちA鹼基」,TAかつたかしそく利用りようTaq聚合酶此特性とくせい,TaqてきPCR產物さんぶつざい3'末端まったんかいいちA,此時ただ須有一個與其互補的T表現ひょうげんざいしつたいじょうそくのう彼此ひしもたれきん,藉由接合せつごう連接れんせつおこりらい透過とうか此方こちらしきはぶけきりせい酶剪きりてき時間じかん直接ちょくせつ利用りようPCR產物さんぶつあずかしつたい彼此ひしゆう互補兩端りょうたんてき特性とくせい快速かいそく黏合おこりらい

PCRちゅうてきTaq聚合酶

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じゅうせい纪八じゅう年代ねんだいはつ凯利·きよしとぎざい鲸鱼しゅうえいCetus Corporation研究けんきゅうDNA合成ごうせいざい生物せいぶつ科技かぎじょうてき应用。きよしとぎ斯熟悉DNA寡核苷酸さく为目标DNAさがせ针、さくDNA测序引物ひきものさくcDNA合成ごうせい引物ひきものてきわざ术。きよしとぎ斯在1983ねん开始尝试はた两个引物ひきものあずか标DNAかただん杂交きさき加入かにゅうDNA聚合酶,此方こちらほう以实现指すう级别てきDNA复制[6]だいりょう两前たいちゅう间的DNAかただん[3]ただしざいまい轮复せいきさき需要じゅようしょう混合こんごうぶつ热到90°C以上いじょう使つかいしん合成ごうせいてきDNA熔解;两条DNA链分开后かたなり为下一轮复制的模板。ざい发现Taq酶之まえ热过ほど也会使とう使用しようてきだい肠杆きんDNA聚合酶Iしつかつ。Taq酶的应用使PCRざい高温こうおん进行(~60°C),ゆうじょ于提だか引物ひきもの专一せい、减少とく异性产物。PCRただ需在ふう闭试かんちゅう配合はいごうしょう对简单的热循环仪えいthermal cyclerうえ进行。よし此Taq酶是かい分子生物学ぶんしせいぶつがくちゅう众多ゆう关DNA分析ぶんせきてき问题てきもとせき[2]

まいり

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脚注きゃくちゅう

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  1. ^ 1.0 1.1 Chien A, Edgar DB, Trela JM. Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophile Thermus aquaticus. J. Bact. 1976, 127 (3): 1550–7. PMC 232952可免费查阅. PMID 8432. 
  2. ^ 2.0 2.1 Saiki, RK; et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase.. Science. 1988, 239 (4839): 487–91 [2014-05-15]. PMID 2448875. doi:10.1126/science.2448875. (原始げんし内容ないようそん档于2008-12-19). 
  3. ^ 3.0 3.1 Saiki, RK; et al. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985, 230 (4732): 1350–4 [2014-05-15]. PMID 2999980. doi:10.1126/science.2999980. (原始げんし内容ないようそん档于2008-12-19). 
  4. ^ 4.0 4.1 Lawyer FC; et al. High-level expression, purification, and enzymatic characterization of full-length Thermus aquaticus DNA polymerase .... PCR Methods Appl. 1993, 2 (4): 275–87. PMID 8324500. 
  5. ^ Tindall KR and Kunkel TA. Fidelity of DNA synthesis by the Thermus aquaticus DNA polymerase. Biochemistry. 1988, 27 (16): 6008–13. PMID 2847780. doi:10.1021/bi00416a027. 
  6. ^ Mullis KB. The unusual origin of the polymerase chain reaction. Sci. Am. April 1990, 262 (4): 56–61, 64–5. PMID 2315679. doi:10.1038/scientificamerican0490-56.